(一)國外測定法
根據(jù)不萊梅纖維研究所A.schcnck博士的研究成果,不萊梅苔黑素測定法為檢測有黏性傾向且含糖集中的棉纖維提供了一種可靠的方法。它能將所有的糖分離出來,并與苔黑素形成有色絡(luò)合物,使反應(yīng)具有特異性。
1.測定原理
將苔黑素(3,5-二羥基甲苯)的濃硫酸溶液加到棉纖維的水萃取物中,可使低糖和多糖分解成糠醛衍生物,與苔黑素生成明顯的紅色絡(luò)合物,隨著糖液中總糖含量的不同,生成絡(luò)合物后溶液的顏色從檸檬黃到深紅呈現(xiàn)出不同的顏色系列。通過與標(biāo)準(zhǔn)色卡比較,可檢測萃取物中的含糖濃度。
2.測定步驟
(1)配制試劑:將0.2g3,5-二羥基甲苯溶解在100g95%～97%的濃硫酸中,在10℃的冷藏條件下靜置約一星期。
(2)測定方法:將制備好的1g棉纖維試驗試樣放入50mL的兩次蒸餾水中,搖動15min。
為了加快測定速度,可用1根移液管將1mL溶液移入試管中,從一瓶制備好的苔黑素溶液中取2mL加入試管,輕輕搖動后即出現(xiàn)顯色反應(yīng)(注意溶液會發(fā)熱),10min后用一套標(biāo)準(zhǔn)色卡便可確定溶液的含糖濃度(目視)。若用光度計檢測溶液顏色的透明度,須在有色的測定溶液中加入兩次蒸餾水至25mL,將光度計設(shè)置在420nm波長,以水為對照,測定其透明度。

圖顯示出不同成分的糖形成了有區(qū)別的顏色透明度。這一方法非常適用于定性測定,但也可采用苔黑素法檢測所有糖的成分。比較左圖中的幾條曲線,說明不同的糖會與同量苔黑素溶液形成不同的顏色深度。這種方法可通過顏色深度或光度值估算出棉纖維中蜜露的含量,如果想用該法定量測定各種不同的糖分,必須使不同的糖分能順利地通過苔黑素檢驗。
用不萊梅苔黑素法檢測棉纖維上的蜜露時,若棉纖維上蜜露值超過或等于色標(biāo)上的5時,則有黏性。 不萊梅苔黑素測定法屬于全糖測定法。由于糖在分解成糠醛衍生物時,要求的條件比較苛刻,因而該方法的普及性不好。
(二)國內(nèi)測定法
國內(nèi)稱不萊梅苔黑素測定法為定量法,是參照德國不萊梅的苔黑素試驗法進(jìn)行測定的方法。根據(jù)GB/T16258—1996標(biāo)準(zhǔn),此法是用3,5-二羥基甲苯—硫酸溶液作顯色劑,使用分光光度計定量測定棉花含糖量的試驗方法。
1.測定原理
在非離子表面活性劑的作用下,使棉纖維上的糖溶于水中,糖在強(qiáng)酸性介質(zhì)中轉(zhuǎn)化為醛類,與3,5-二羥基甲苯發(fā)生顯色反應(yīng),生成橙黃色化合物,用分光光度計在425nm處與標(biāo)準(zhǔn)工作曲線比較定量。
2.試劑和材料
(1)蒸餾水(下面所有水指蒸餾水)。
(2)硫酸(濃度1.84g/mL)。
(3)3,5-二羥基甲苯。
3,5-二羥基甲苯—硫酸溶液:稱取3,5-二羥基甲苯0.2g,置于100mL燒杯中,加入100g(約54mL)硫酸,攪拌使之全部溶解?，F(xiàn)用現(xiàn)配。
(4)脂肪酸烷醇酰胺(尼納爾,工業(yè)級)。
①測定用脂肪酸烷醇酰胺(0.04%)溶液:稱取0.4g脂肪酸烷醇酰胺溶于1000mL水中,攪拌均勻。
②提取用脂肪酸烷醇酰胺(0.005%)溶液:量取測定用脂肪酸烷醇酰胺溶液100mL,溶于700mL水中,攪拌均勻。
(5)D-果糖。
①糖標(biāo)準(zhǔn)儲備溶液:稱取D-果糖0.200g,用水溶解后轉(zhuǎn)入100mL容量瓶中,用水稀釋至刻度。濃度為2.0mg/mL。
②糖標(biāo)準(zhǔn)工作溶液:用移液管吸取0.5mL、1.0mL、1.5mL、2.0mL、2.5mL、3.0mL、4.0mL、5.0mL糖標(biāo)準(zhǔn)儲備溶液,分別注入50mL容量瓶中,用水稀釋至刻度,該糖標(biāo)準(zhǔn)系列濃度分別為0１020mg/mL、0.040mg/mL、0.060mg/mL、0.080mg/mL、0.10mg/mL、0.12mg/mL、0.16mg/mL、0１20mg/mL。
3.主要儀器及器具
(1)分光光度計:波長200～800nm。
(2)天平:分度值0.01g、0.001g。
(3)振蕩器:>200次/min。
(4)恒溫水浴鍋。
(5)250mL磨
4.試驗樣液準(zhǔn)備
(1)試驗室樣品:按GB6097—1985規(guī)定抽取實(shí)驗室樣品。
(2)試驗樣品:從實(shí)驗室樣品中隨機(jī)抽取不少于15g的試驗樣品。
(3)試驗試料:去除試驗樣品中粗大雜質(zhì),充分混合(或用混樣品),從中稱取3份作為試料,每份試料重2.0g±0.1g。余樣備用。
5.測定步驟
(1)試樣溶液的配制:取3份試料,分別置于250mL錐形瓶中。加入0.005%脂肪酸烷醇酰胺溶液200mL,在振蕩器上振蕩10min。用玻璃棒將棉花翻過后繼續(xù)振蕩10min,用定量濾紙過濾,得到3份試料溶液。
(2)空白試驗:吸取0.04%脂肪酸烷醇酰胺溶液1.0mL,注于25mL比色管中。將比色管置于70℃恒溫水浴鍋中,快速加入3,5-二羥基甲苯—硫酸溶液2.0mL,搖勻,繼續(xù)置于水浴鍋中40min,取出,加入0.04%脂肪酸烷醇酰胺溶液20mL,搖勻,冷卻至室溫,用0.04%脂肪酸烷醇酰胺溶液定容至刻度。將儀器調(diào)整好,在425nm波長處測定溶液的吸光值,記錄其讀數(shù),保留兩位小數(shù)。
(3)工作曲線繪制:吸取糖標(biāo)準(zhǔn)工作溶液各1.0mL,注于25mL比色管中。重復(fù)步驟(2)。
以吸光值為縱坐標(biāo)、糖的標(biāo)準(zhǔn)工作溶液濃度(mg/mL)為橫坐標(biāo)繪制工作曲線。
6.結(jié)果計算
用試料溶液的吸光值減去空白溶液的吸光值,在工作曲線上查出試料溶液的濃度,按下式計算糖的含量。

式中:X———試料含糖率;
c———在標(biāo)準(zhǔn)曲線上查得試料溶液中糖的濃度值,mg/mL;200———預(yù)處理試料時所加脂肪酸烷醇酰胺溶液量,mL;2×1000———試料重量,mg。
所得結(jié)果修約至兩位小數(shù)。以三次試驗結(jié)果的算術(shù)平均值作為該試料的平均含糖量。本方法適用于棉纖維所含全糖的定量測定,是測定棉纖維含糖比較準(zhǔn)確的一種方法。